INTRODUCCIÓN

El piretro, Crysanthemun cineriaefolium Trev., es una planta perenne de la familia de las Compuestas.

Es herbácea con tendencia a leñosa en la corona, así denominada, el área de nacimiento del follaje.

Es de polinización cruzada con un tipo de alogamia que se origina en su sistema de incompatibilidad esporofítica.

El principio activo, llamado piretrina, es de naturaleza compleja y resultante de la integración de seis sustancias insecticidas químicamente definidas.

Las flores se cosechan a los diez meses de desarrollo de las plantas, cuando una tercera parte de aquellas han abierto, coincidente se estima, con un nivel elevado de concentración de principio activo.

Las flores cosechadas, se secan, se muelen y se someten a extracción con solventes orgánicos.

El extracto crudo debe ser refinado para eliminar resinas , ceras y pigmentos, luego estandarizado y así se encuentra listo para la formulación.

En la práctica las piretrinas se combinan corrientemente con sinérgidos, como el butóxido de piperonilo (piperonyl butoxide), llamado P.B.O. - (3,4 -methylenedioxy-6-propylbenzil butyl diethyleneglycol ether). También se menciona el MOK 264 (N-octyl byciclo heptene dicarboximide).

ASPECTOS ECONÓMICOS DEL CULTIVO DEL PIRETRO

El uso, a veces indiscriminiado de insecticidas químicos, cuya toxicidad y efecto residual son una de las causales de la contaminación ambiental, ha determinado el interés creciente por los insecticidas biológicos inocuos y degradables, como las piretrinas.

En el mundo, Kenya es el principal productor con un promedio de los últimos 5 años de 15.000 toneladas de piretro, estimado en flor seca, cifra cuya significación se puede visualizar mejor, considerando que las flores secas tienen un 10 % de humedad contra un 75 % de humedad original.

El extracto se procesa utilizándose, en algunos casos, como un polvo fino con fines de incorporación a los espirales mata-mosquitos.

Otra parte de las flores que se procesan a través de solventes orgánicos, son comercializados como extracto líquido desde la piretrina cruda con presencia de oleorresinas, hasta el producto altamente refinado que se utiliza como ingrediente en insecticidas de aerosol.

Kenya, como principal productor tiene exportaciones anuales de veinte millones de dólares en promedio anual de los últimos cinco años,y la República Argentina es un comprador indirecto de ese país y directo de Ecuador en las cifras siguientes:

Cuadro I.

Nuestro país reúne las condiciones ecológicas, geográficas y técnicas para producir piretrinas en cantidad y calidad. Posteriores estudios de factibilidad sobre su comercialización como flor seca, oleorresina o extracto purificado, determinarán lo más adecuado para nuestro país.

MEJORAMIENTO DEL PIRETRO

Consta de las siguientes consideraciones:

1 - Condiciones ambientales

Las condiciones requeridas por el cultivo son las siguientes:

• Temperatura: mínima de 4° C hasta máxima de 32° C anuales con una media de 15° C. No obstante algunas formas procedentes del Japón son menos exigentes, admitiendo una temperatura media de 7° C.

• Precipitación: requiere de 800 a 900 mm anuales.

• Humedad relativa: debe ser baja con tendencia a clima seco.

• Para el piretro es importante que disponga de gran luminosidad , por lo que, para su cultivo, se prefieran zonas con elevaciones de entre 900 a 1.800 metros sobre el nivel del mar.

• Con respecto al suelo, la bibliografía expresa que el mismo debe ser bien drenado y arenoso.

Estas condiciones edafo-climáticas son coincidentes con las que poseen las sierras del centro-sur de la provincia de Córdoba, en las cuales se iniciarán los programas de implantación del cultivo.

2 - Introducción del material

Se ha procedido a la introducción de material de los siguientes lugares:

1. Yugoslavia. Costa Dálmata.
2. Japón. Isla de Hoklcaido.
3. Italia. Trieste.
4. Bulgaria.
5. Checoeslovaquia.
6. Nueva Ruinea.

El procesamiento de la semilla recibida se realizó de acuerdo a los siguientes aspectos:

1. Fecha de germinación,
2. Fecha de raleo, cuando fue necesario,
3. Reconocimiento del vigor en escala de O a 5.
4. Transplante a campo cuando alcanza 12 cir de altura.
5. Fecha de comienzo de floración.
6. Fecha de plenitud de floración, que ocurre cuando las 2/3 partes de la planta están florecidas.

Este sistema permite evaluar el rango de adaptación de las muestras recibidas.

3 - Observaciones y criterio selectivo a campo

Comprobada la adaptación del material se realizan las siguientes observaciones:

1. Rendimiento de flor seca y fresca por planta.
2. Contenido de materia seca de flor por danta.
3. Tamaño de flor por planta (estimado como el oeso de 100 flores frescas).
4. Resistencia al vuelco, con eliminación de olantas volcadas.
5. Eliminación de plantas "ciegas", o sea que no producen flores.
6. Resistencia a enfermedades fungosas.
7. Análisis del principio activo en cantidad y calidad. (Se trata en capítulo aparte).

Estas observaciones son previas para orientar el proceso de selección clonal, que por sus características, requieren observaciones repetidas durante un mínimo de dos años y sobre un número de plantas superior a 50 individuos para cada caso.

Un dato muy importante en la selección es el referido al número de flores, por lo cual se realiza el análisis de correlación de ese carácter con otros tales como, foliosidad, altura y tamaño de la hoja, de manera tal que se pueda ir calificando a las plantas antes de la floración.

Por esa razón también se analiza la correlatividad entre ancho y largo de hojas estandarizadas versus altura, y proyección de planta con el fin de verificar en cada procedencia el sentido positivo de la correlación múltiple y facilitar de esta manera la selección de plantas élite.

Con este objeto se establecen en el Campo Experimental las siguientes correlaciones:

• Altura de planta Vs. Ancho de hoja
• Altura de planta Vs. Largo de hoja
• Proyección de mata Vs. Ancho de hoja
• Proyección de mata Vs. Largo de hoja
• Número de flores Vs. Altura de la planta
• Número de flores Vs. Proyección de mata
• Número de flores Vs. Ancho de hoja
• Número de flores Vs. Largó de hoja
• Tamaño de flores Vs. Altura de planta
• Tamaño de flores Vs. Proyección de mata
• Tamaño de flores Vs. Ancho de hoja
• Tamaño de flores Vs. Largo de hoja
• Peso de flores Vs. Altura de planta
• Peso de flores Vs. Proyección de mata
• Peso de flores Vs. Ancho de hoja
• Peso de flores Vs. Largo de hoja
• Contenido de piretrina Vs. Altura de planta
• Contenido de piretrina Vs. Proyección de mata
• Contenido de piretrina Vs. Ancho de hoja
• Contenido de piretrina Vs. Largo de hoja

El análisis de las correlaciones múltiples permitirá el establecimiento de índices de selección que a su vez permiten calificar en el Campo Experimental plantas promisorias antes de la floración.

Resumiendo, el criterio selectivo está orientado a la obtención de buen rendimiento de piretrina por hectárea. Ese rendimiento se compone a su vez de: rendimiento de flores frescas; contenido de materia seca de flor por planta, y contenido de piretrinas por planta en cantidad y calidad.

Existe una concurrencia de características de la planta para tales objetivos y por esa razón deben estimarse: el tamaño de flor junto con el número de flores por tallo, y el número de tallos con el peso de flores por planta.

A su vez el número de flores por tallos, conjuntamente con el tamaño, son componentes que solamente pueden ser efectivos cuando no existe propensión al vuelco.

Número de días a floración consiste también en un componente de importancia porque determina la época de cosecha, la que debe estar concentrada en un número de días no superior a treinta para poder bajar los costos de recolección y disminuir los riesgos climáticos.

4 - Selección clonal

Es obvio que un programa de implantación debe efectuarse con celeridad, para lo cual la selección clonal permite, una vez identificadas las plantas individuales, una rápida difusión por división de matas.

Por las razones mencionadas anteriormente, también las plantas selectas deben poseer tal capacidad para ser divididas, establecerse y prosperar en el campo, lo que constituye una expresión genética intrínseca.

El procedimiento a seguir es el siguiente:

• De las plantas élite o seleccionadas se efectúa una división de matas de 10 a 15 plantas, que constituyen a partir de ese momento una línea clonal, en la cual se continúan las estimaciones de ios parámetros genéticos de rendimiento.

• Las mejores líneas clónales (planta selecta más contenido de principio activo) se dividen otra vez formando lotes de 60 plantas cada uno.

• A partir de esa primera parcela de 60 plantas, se dividen de nuevo cinco veces más, de tal manera que cada línea clonal selecta pueda ser evaluada en cinco repeticiones.

• La última etapa de selección para la línea clonal consiste en un ensayo comparativo de las mejores líneas clonales, en diferentes localidades, con el fin de verificar la adaptación diferencial que los clones pueden poseer, por su constitución genética diferente.

El análisis estadístico se basa en parcelas de 60 plantas y en el Ensayo Comparativo de Rendimientos, cada una de esas parcelas figurará con cinco repeticiones.

Además es preciso manifestar que el rendimiento en flores es una integración del total de flores frescas recolectadas durante el lapso que dure la floración.

Es importante destacar que siempre un aspecto básico en el proceso es conocer la persistencia del contenido en calidad y cantidad de principio activo.

Este sistema de selección de planta individual permite utilizarlas con otros métodos de mejoramiento de mayor elaboración y duración, que para el caso de nuestro Programa también se efectúan concurrentemente y que son las siguientes:

• Utilización del sistema de incompatibilidad oara producción de semilla híbrida, basada en el rendimiento de la línea madre y con polinización dirigida.

• Selección recurrente para capacidad combinatoria general, que en lincamientos generales consiste en la selección de grupos de plantas élite en base a la perfomance de la progenie resultante y en la cual la prueba del polycross-progenie, se utiliza para el análisis.

5 - Análisis del principio activo

Las flores de piretro fueron secadas al aire, al abrigo de la luz, y el material así obtenido fue triturado y desmenuzado en fracciones de 10 gramos cada una, que fueron extraídas durante 8 horas con éter de petróleo 60-80° por medio de un extractor de Soxlhlet.

El extracto etéreo se dejó reposar durante una noche en heladera y luego se filtró por algodón. Se concentró luego a presión reducida hasta eliminación total del solvente resultando un extracto oleorresinoso de peso medio 0,252 g entre todas las muestras analizadas (2,52 %).

El extracto fue filtrado por una columna de florisil (Clean-up) para la eliminación de gomas, mucílagos y resinas, empleando éter de petróleo y cloroformo como solventes de elución, y finalmente el eluato concentrado a pequeño volumen por evaporación a presión reducida fue analizado por cromatografía en fase gaseosa mediante un aparato Varian modelo 3700 provisto de sistema de integración de picos y computación de datos modelo CDS 111 de la misma marca. Se empleó una columna de vidrio de 1,80 m x 3 mm al 2 %, OV-1 + 3 % OV-210 sobre Chromosorb W 80/100 detector de ionización de llama (FTD), tomando como referencia una mezcla de piretrinas de 56,4 % de pureza provista por la United State Environmental Protection Agency de los Estados Unidos de América.

Las determinaciones efectuadas (cromatogramas N° 2 referencia y cromatograma N° 3 extracto problema sobre plantas selectas) permitieron establecer que el extracto oleoresinoso esta constituido aproximadamente por un 29 % a 30 % de materia activa (piretrinas), correspondiendo un 14,8 % a las piretrinas I y 15,2 % a las piretrinas II. Resultados similares se obtuvieron empleando para el análisis una columna de acero de 2 m x 1,5 mm al 20% de succinato de polietilenglicol sobre Chromosorb W 60/80 (cromatograma N° 4).

Posteriormente se certificaron estas determinaciones por análisis de los extractos por cromatografía en capa fina, empleándose placas de 0,25 mm de silicagel (Kieselgel 60 F 254 Merck) sensibles a la luz ultravioleta y como solvente de elución acetato de etilo y éter de petróleo 1:4, comparándose los distintos Rf de las referencias y extracto con los de la literatura.

Este análisis, debe ser considerado previo y tiene el sentido de establecimiento y perfeccionamiento de la técnica a aplicar, la cual debe reflejar el contenido porcentual y también la calidad comercial.

La cifra obtenida es del 7 por mil de contenido de principio activo, oero ella sólo se refiere a la puesta apunto de la técnica, ya que la línea base fijada para la selección de plantas élite es del 14 por mil de principio activo por individuo.

Es decir que en trabajo de selección previo a la implantación se consideran los siguientes aspectos: selección de plantas por características de rendimiento y por su contenido de piretrina en cantidad y calidad.

Esas son las bases sobre las cuales se estructura el Programa de Implantación del piretro en la provincia de Córdoba, el cual parte de una tecnología actualizada que procura que la planta de piretro, como principal componente, haya sido objeto de una selección genética adecuada previa a su difusión.